1. 样品处理

    a) 对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟，无水乙醇5分钟，90%乙醇2分钟，70%乙醇2分钟，蒸馏水2分钟。

    b) 对于冰冻切片：经固定的切片置蒸馏水2分钟。

    c) 对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10分钟以上，蒸馏水洗涤2分钟，换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。

    2. 苏木素-伊红染色

    a) 对于上述处理好的样品，用苏木素染色5-10分钟（可以根据染色结果和要求调整时间），回收染色液后，用自来水冲洗去除残留的染色液，

    b) 蓝化和分色：用自来水冲洗，待切片变成蓝色后，再用含0.5～1％盐酸的70％酒精溶液进行分色，脱去多余的染料（因为苏木精染色后，细胞核着色较深，细胞质及结缔组织纤维等亦稍着色，影响下步染色及观察）。然后再用自来水冲洗，使之蓝化，需5～10分钟。

    c) 伊红染色：切片用蒸馏水浸洗后，放入1％伊红水溶液，浸染5～10分钟。

    d) 脱水：将切片用蒸馏水洗去附在载玻片上的染液后，经70％、80％、90％酒精分色及脱水，再经95％酒精和2次无水酒精脱水，每级一般为2分钟。

    e) 透明：切片入二甲苯2次，每次2分钟。

    f) 封固：从二甲苯中取出切片，在切片的组织上滴加适量树胶，上面再加一盖玻片，使树胶布满于盖玻片与载玻片之间的间隙，封固即告完成。将封好的切片标本放入烤箱，待盖玻片粘着牢固后，即获得可供长期观察和保存的H·E染色标本。

    3. 进行其它染色

    如果进行免疫荧光染色，伊红染色液染色后，70％乙醇洗涤2次，每次2分钟，再用PBS或生理盐水、TBS、TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟，然后就可以进行免疫荧光染色或其它的染色。

注意事项

    1.需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇、盐酸酒精。如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯、中性树胶或其它封片剂。如果样品是石蜡切片，需自备90％乙醇、无水乙醇以及二甲苯。

    2.染色液可以重复使用多次，认为效果不佳时再更换新的染色液。样品数量很多时，可使用染色架和染色缸，以便于操作。

    3.第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。

    4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。